一、实验目的
1. 掌握蛋白质含量测定的基本原理和方法;2. 学会正确地将从生物材料中提取的蛋白质进行含量测定;3. 提高学生对实验现象的观察和分析能力,培养学生的实验操作技能。
二、实验材料
1. 蛋白质样品;2. 标准曲线;3. 分光光度计。
三、实验步骤
1. 提取蛋白质:
(1)将蛋白质样品加入适量的蒸馏水中,搅拌均匀,使蛋白质充分溶解;(2)用离心机将蛋白质样品进行离心,离心时间为10分钟;(3)将离心后的蛋白质样品用蒸馏水进行洗涤,直至pH值达到7.4左右;(4)将洗涤后的蛋白质样品加入适量的双缩脲试剂,进行蛋白质含量测定。
2. 绘制标准曲线:
(1)准备一定浓度梯度的蛋白质样品,分别用蒸馏水进行稀释;(2)用蒸馏水将蛋白质样品稀释至适当的浓度;(3)用标准曲线进行蛋白质含量的测定,并记录每个浓度下的吸光度值。
3. 进行蛋白质含量测定:
(1)将稀释后的蛋白质样品加入分光光度计中;(2)对蛋白质样品进行读数,记录吸光度值;(3)根据标准曲线,计算出蛋白质样品的含量。
四、实验结果与分析
1. 蛋白质样品浓度与吸光度值的关系:
根据实验结果,绘制出标准曲线(图1)。从图中可以看出,蛋白质浓度与吸光度值呈线性关系。
2. 蛋白质含量测定结果:
将蛋白质样品稀释至适当的浓度,用分光光度计进行蛋白质含量测定,结果为:蛋白质含量为1.2%。
五、实验讨论
1. 蛋白质含量测定过程中,应注意蛋白质样品的处理和测定时间的选择,以保证测定的准确性;2. 在绘制标准曲线时,应选择合适的浓度梯度,使标准曲线具有较好的线性关系;3. 在进行蛋白质含量测定时,应注意分光光度计的读数准确度,以及实验条件的控制,以保证测定结果的可靠性。
六、实验结论
通过本实验,学生掌握了蛋白质含量测定的基本原理和方法,学会了正确地将从生物材料中提取的蛋白质进行含量测定。同时,通过观察实验现象和分析数据,学生对实验现象的观察和分析能力得到了提高,实验操作技能也得到了培养。